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    转染PDGF-B基因的猫角膜内皮细胞的载体培养         
    转染PDGF-B基因的猫角膜内皮细胞的载体培养
    作者:罗文娟,… 文章来源:青岛大学医学院附属医院眼科 266003 点击数:1267 更新时间:2004/6/9
    目的 应用转基因技术体外培养稳定表达人血小板源性生长因子B(PDGF-B)的猫角膜内皮细胞,并将其移植到羊膜载体,使其形成连续规则的单层内皮细胞,为转基因角膜内皮细胞载体移植作准备。方法 从健康产妇胎盘组织中提取总RNA,通过RT-PCR方法,扩增出PDGF cDNA,将其插入真核表达载体PcDNA4构建成重组真核表达载体PcDNA4/PDGF-B, 应用脂质体介导法转染猫角膜内皮细胞,G418筛选稳定克隆,传代接种于羊膜载体上,培养2周。于倒置相差显微镜下观察转染PcDNA4/PDGF-B的猫角膜内皮细胞生长情况,用免疫组织化学染色法和半定量RT-PCR法检测PDGF在猫角膜内皮细胞中的表达情况,用扫描电镜观察转染PcDNA4/PDGF-B的猫角膜内皮细胞在羊膜上的生长情况。结论 应用转基因技术可体外培养稳定表达PDGF的猫角膜内皮细胞,并移植到羊膜载体形成稳定单层,为转基因人及动物角膜内皮细胞的细胞移植的研究打下基础。
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